注意事項(xiàng)
1. MOC1細(xì)胞活性特別高，增值速度非常快，不建議傳代密度太大，而選擇稀一點(diǎn)重鋪，等長(zhǎng)滿80%左右傳代的時(shí)候，很難消化下來(lái)，建議加入0.25%EDTA的胰酶進(jìn)去后充分混勻所有細(xì)胞都接觸到胰酶，放置到培
養(yǎng)箱進(jìn)行消化，時(shí)長(zhǎng)大約是3-4分鐘左右后拿出來(lái)
2. 在培養(yǎng)器皿的側(cè)邊進(jìn)行拍打幫助細(xì)胞脫落，拍打過(guò)程大約持續(xù)2分鐘左右才會(huì)脫落大部分細(xì)胞，如果脫落比例還不是很多，也可以重新放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化1-2分鐘后再次拿出來(lái)進(jìn)行拍打脫落，等80-90%細(xì)胞都脫
落后再終止消化，離心重懸再重新鋪瓶，分散均勻。
3. MOC2細(xì)胞貼壁性和常規(guī)細(xì)胞類似沒(méi)有特別牢固。倍增周期也沒(méi)有MOC1快。采用常規(guī)消化方法處理。
常溫發(fā)貨
收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長(zhǎng)滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成1個(gè)1ml凍存管，
另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存2-3只后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn)，以防突發(fā)情況引起斷種。
干冰發(fā)貨
常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè)，均沒(méi)有復(fù)蘇成功的情況即時(shí)留存復(fù)蘇照片通知我們。
貼壁細(xì)胞
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％(w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分
變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的
生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
4. 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
5. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
懸浮細(xì)胞
懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10?~1×10?個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸
液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根
據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。
生物安全
1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
找尋抗體，試劑，細(xì)胞裂解液，試劑盒
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