ELISA 的優點和缺點

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;ELISA是一種廣泛用于測定液體樣品中蛋白質、抗體或激素的免疫分析技術。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的標準程序通常是將蛋白質、抗體或激素（即抗原）直接或用捕獲抗體（captureAb）固定在固相載體上，然后加入一抗（Ab），形成抗原抗體復合物。如果該抗體已經酶標記，則可直接用于測定抗原的量。若沒有，則可使用另一種酶標記的二抗來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入酶的底物，作用后產生的顏色深度與樣品中抗原的量成正比。基于此原理，可計算出樣品中抗原的總量或濃度。</span></p> <p>&nbsp;</p> <p style="text-align: center;"><span style="font-size: 12px;"><img src="/images/upload/Image/微信圖片_20250331170212.jpg" alt="elisa試劑盒" width="500" height="375" /></span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h2><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 常用ELISA方法的優缺點</span></h2> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 常用的ELISA技術主要有四種：直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。下文將逐一解釋這些方法的概念、優缺點。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">直接法</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標記的一抗，即可測定抗原的總量，這個一抗的特異性非常重要。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優點：操作簡單，無需使用二抗，可避免交叉反應。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點：實驗中的一抗必須用酶標記，但并不是每種抗體都適合標記，而且成本相對較高。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 間接法</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 該測定方法與直接法類似，不同之處在于一抗未經酶標記，而是使用酶標記的二抗來識別一抗，從而測定抗原的量。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優點：二抗可以增強信號，并且針對不同的檢測方法有多種選擇。未經酶標記的一抗可保留最高的免疫反應性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點：發生交互反應的概率較高。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">夾心ELISA</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 待檢測的抗原被包被在兩種抗體之間，其中一種抗體將抗原固定在固相載體上，即捕獲抗體。另一種抗體是檢測抗體。這種抗體可以用酶標記，直接測定抗原的量；也可以不標記，然后用酶標記的二抗測定抗原的量。必須仔細選擇這兩種抗體，以避免相互作用或競爭相同的抗原結合位點。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優點：靈敏度高、特異性高、無需事先純化抗原。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點：抗原必須具有兩個以上的抗體結合位點。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 競爭性ELISA</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 樣品中的抗原（游離抗原）與純化固定在固相載體上的抗原（固定抗原）競爭同一種抗體。樣品中游離抗原較多時，能結合的抗體較多，而固定抗原則只有較少的抗體能與其結合，反之亦然。經過清洗步驟后，游離抗原抗體復合物被洗去，只留下固定抗原抗體復合物。將結果與僅有固定抗原的對照結果進行比較，根據顏色差異即可計算出樣品中的抗原。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優點：可以適用于比較不純的樣品，數據重現性很高。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點：總體敏感性和特異性較差。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 總而言之，ELISA技術因其操作簡便、靈敏度高、特異性強等優點，已成為生物醫學研究和臨床診斷中不可或缺的工具。四種主要的ELISA方法，即直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法，各有其優缺點，適用于不同的實驗目的和抗原特性。研究人員需要根據具體的實驗需求，例如抗原的純度、可獲得的抗體類型以及所需的靈敏度和特異性，選擇最合適的ELISA方法。對不同ELISA方法的理解和合理選擇，將有助于獲得更準確可靠的實驗結果，推動相關領域的研究進展。</span></div>